One World One Fight
─ Internationale samenwerking om een wereldwijde gemeenschap van gemeenschappelijke lot op te bouwen die reageert op Covid-19 pandemische uitdaging
De roman coronavirus die over de hele wereld vegen, heeft geresulteerd in een voortdurende wereldwijde covid-19 pandemische crisis. De roman coronavirus heeft geen grenzen, geen land zal worden gespaard van deze strijd tegen Covid-19. Als reactie op deze wereldwijde Covid-19-pandemie levert Liming Bio-Products Corp bijdragen om het welzijn van onze wereldwijde gemeenschappen te ondersteunen.
Onze wereld wordt momenteel geconfronteerd met de ongekende impact van de nieuwe coronavirusziekte 2019 (COVID-19) pandemie. Tot op heden is er geen efficiënt medicijn beschikbaar voor de behandeling van deze ziekte. Er zijn echter veel diagnostische tests ontwikkeld voor de detectie van COVID-19. Deze tests zijn gebaseerd op moleculaire of serologische methoden om het nieuwe coronavirusspecifieke nucleïnezuur- of antilichaambiomarkers te detecteren. Aangezien COVID-19 een pandemische status heeft bereikt, is een vroege diagnose van de nieuwe coronavirusinfectie van cruciaal belang bij het beoordelen van de verspreiding van het virus en het bevatten, maar er bestaat nog geen perfecte test voor universeel gebruik. We moeten weten welke tests mogelijk kunnen worden gebruikt voor screening, diagnose en monitoring van de COVID-19-infectie en wat hun beperkingen zijn. Het is heel belangrijk hoe u deze wetenschappelijke hulpmiddelen beter kunt gebruiken en om de opkomst van deze snel verspreidende en ernstige ziekte te identificeren en te beheersen.
Het doel van de detectie van de nieuwe coronavirus is om te bepalen of een persoon die COVID-19-infectie heeft of een asymptotische drager die het virus stil kan verspreiden, om essentiële informatie te bieden om de besluitvorming voor klinische behandeling te begeleiden. Eerdere studies hebben aangetoond dat 70% van de klinische beslissingen afhankelijk zijn van de testresultaten. Wanneer verschillende detectiemethoden worden gebruikt, zijn de vereisten van de detectiereagenskits ook verschillend.
Figuur 1
Afbeelding 1:Diagram met de belangrijkste fasen van algemene biomarkerniveaus tijdens het typische tijdsverloop van COVID-19-infectie. De x-as geeft het aantal infectiedagen aan en de y-as geeft de virale belasting, concentratie van antigenen en concentratie van antilichamen in verschillende perioden aan. Antilichaam verwijst naar IgM- en IgG -antilichamen. Zowel RT-PCR als antigeendetectie worden gebruikt om de aanwezigheid of afwezigheid van nieuw coronavirus te detecteren, wat direct bewijs is voor vroege detectie van de patiënt. Binnen een week na virale infectie heeft PCR -detectie of antigeendetectie de voorkeur. Na de nieuwe coronavirusinfectie gedurende ongeveer 7 dagen, is het IgM -antilichaam tegen de nieuwe coronavirus geleidelijk toegenomen in het bloed van de patiënt, maar de duur van het bestaan is kort en de concentratie ervan neemt snel af. Daarentegen verschijnt het IgG -antilichaam tegen het virus later, meestal ongeveer 14 dagen na de virusinfectie. De IgG -concentratie neemt geleidelijk toe en blijft een lange periode in het bloed bestaan. Dus als het IGM wordt gedetecteerd in het bloed van de patiënt, betekent dit dat het virus onlangs is geïnfecteerd, wat een vroege infectiemarker is. Wanneer het IgG -antilichaam wordt gedetecteerd in het bloed van de patiënt, betekent dit dat de virale infectie al enige tijd is. Het wordt ook late infectie of eerdere infectie genoemd. Het wordt vaak gezien bij patiënten die zich in de herstelfase bevinden.
The Biomarkers of Novel Coronavirus
Het nieuwe coronavirus is een RNA -virus, dat bestaat uit eiwitten en nucleïnezuren. Het virus valt het lichaam van de gastheer (mens) binnen, komt cellen binnen via bindingsplaats overeenkomstige receptor ACE2 en repliceert in gastheercellen, waardoor het menselijke immuunsysteem reageert op buitenlandse indringers en specifieke antilichamen produceert. Daarom kunnen de flacon nucleïnezuren en antigenen en specifieke antilichamen tegen nieuw coronavirus theoretisch worden gebruikt als specifieke biomarkers voor de detectie van de nieuwe coronavirus. Voor nucleïnezuurdetectie wordt RT-PCR-technologie het meest gebruikt, terwijl serologische methoden vaak worden gebruikt voor de detectie van de nieuwe coronavirus-specifieke antilichamen. Momenteel zijn er verschillende testmethoden beschikbaar die we kunnen kiezen voor het testen van COVID-19-infectie [1].
Basisprincipes van hoofdtestmethoden voor nieuw coronavirus
Veel diagnostische tests voor COVID_19 zijn tot nu toe beschikbaar, met meer testkits die elke dag goedkeuring krijgen onder een noodvergunning. Hoewel de nieuwe testontwikkelingen met zoveel verschillende namen en formaten komen, zijn alle huidige COVID_19-tests in principe afhankelijk van twee belangrijke technologieën: nucleïnezuurdetectie voor het virale RNA- en serologische immunoassays die virale specifieke antilichamen detecteren (IGM en IgG).
01. Nucleïnezuurdetectie
Reverse transcriptie-polymerase kettingreactie (RT-PCR), lus-gemedieerde isotherme amplificatie (LAMP) en sequencing van de volgende generatie (NGS) zijn de gemeenschappelijke nucleïnezuurmethoden voor de detectie van nieuw coronavirus-RNA. RT-PCR is het eerste type test voor COVID-19, aanbevolen door zowel de Wereldgezondheidsorganisatie (WHO) als het US Centre for Disease Control and Prevention (CDC).
02.Serologische antilichaamdetectie
Antilichaam is een beschermend eiwit dat in het menselijk lichaam wordt geproduceerd als reactie op de virusinfectie. Het IGM is een vroeg type antilichaam, terwijl IgG een later type antilichaam is. Het serum- of plasmamonster wordt meestal onderzocht op de aanwezigheid van specifieke IgM- en IgG-typen van het antilichaam voor de beoordeling van acute en herstellende fasen van COVID-19-infectie. Deze op antilichamen gebaseerde detectiemethoden omvatten colloïdale gouden immunochromatografie-test, latex of fluorescerende microsfeer immunochromatografie, enzym-gekoppelde immunosorbent-test (ELISA) en chemiluminescentie-test.
03. Virale antigeendetectie
Antigeen is een structuur op het virus dat wordt herkend door het menselijk lichaam die het immuunafweersysteem activeert om antilichamen te produceren om het virus van bloed en weefsels te verwijderen. Een viraal antigeen dat op het virus aanwezig is, kan worden gericht en gedetecteerd met behulp van immunoassay. Net als viraal RNA zijn virale antigenen ook aanwezig in de luchtwegen van geïnfecteerde individuen en kunnen ze worden gebruikt om de acute-fase van de COVID-19-infectie te diagnosticeren. Daarom wordt het vaak aanbevolen om de bovenste ademhalingsmonsters zoals speeksel, nasofaryngeale en oropharyngeale watten, diep hoestsputum, bronchoalveolaire lavagluïd (BALF) te verzamelen voor initiële antigeentests.
Selecteren van testmethoden voor nieuw coronavirus
Het selecteren van een testmethode omvat vele factoren, waaronder klinische setting, het testen van kwaliteitscontrole, doorlooptijd, testkosten, monstersverzamelingsmethoden, technische vereisten voor laboratoriumpersoneel, faciliteiten en apparatuurvereisten. De detectie van nucleïnezuren of virale antigenen is om direct bewijs te leveren van de aanwezigheid van de virussen en de diagnose van nieuwe coronavirusinfectie te bevestigen. Hoewel er veel methoden zijn voor antigeendetectie, is hun detectiegevoeligheid van de nieuwe coronavirus theoretisch lager dan die van de RT-PCR-amplificatie. Antilichaamtesten is de detectie van antivirusantilichamen geproduceerd in het menselijk lichaam, dat in de tijd achterblijft en vaak niet kan worden gebruikt voor vroege detectie tijdens de acute fase van virusinfectie. De klinische setting voor detectietoepassingen kan variëren en de monsterverzamelingslocaties kunnen ook verschillend zijn. Voor de detectie van virale nucleïnezuren en antigenen moet het monster worden verzameld in de luchtwegen waar het virus aanwezig is, zoals nasopharyngeale wattenstaafjes, orofaryngeale wattenstaafjes, sputum of bronchoaltolaire lavagedvloeistof (BALF). Voor detectie op basis van antilichamen moet bloedmonster worden verzameld en onderzocht op de aanwezigheid van specifiek antivirusantilichaam (IgM/IgG). Resultaten voor antilichamen en nucleïnezuur kunnen elkaar echter aanvullen. Wanneer het testresultaat bijvoorbeeld het nucleïnezuur-negatieve, IgM-negatief maar IgG-positief is, geven deze resultaten aan dat de patiënt momenteel niet het virus draagt, maar is teruggevonden uit de nieuwe coronavirusinfectie. [2]
Voordelen en nadelen van nieuwe coronavirus -tests
In het diagnose- en behandelingsprotocol voor nieuwe coronavirus pneumonie (proefversie 7) (vrijgegeven door National Health Commission & State Administration of Traditional Chinese Medicine op 3 maart 2020), wordt nucleïnezuur testen gebruikt als de gouden standaardmethode voor de diagnose van de roman Coronavirus -infectie, terwijl antilichaamtesten ook worden beschouwd als een van de bevestigingsmethoden voor de diagnose.
Pathogene en serologische bevindingen
(1) Pathogene bevindingen: nieuw coronavirus nucleïnezuur kan worden gedetecteerd in nasofaryngeale wattenstaafjes, sputum, secreties met lagere luchtwegen, bloed, ontlasting en andere specimens met behulp van RT-PCRAND/of NGS-methoden. Het is nauwkeuriger als monsters worden verkregen uit een lagere luchtwegen (sputum- of luchtkanaal extractie). De monsters moeten na verzameling zo snel mogelijk worden ingediend om zo snel mogelijk te testen.
(2) serologische bevindingen: NCP-virusspecifiek IGM wordt gedetecteerd rond 3-5 dagen na het begin; IgG bereikt een titratie van ten minste 4-voudige toename tijdens herstel vergeleken met de acute fase.
De selectie van testmethoden is echter afhankelijk van geografische locaties, medische voorschriften en klinische instellingen. In de VS heeft de NIH Coronavirus Disease 2019 (COVID-19) behandelingsrichtlijnen uitgegeven (bijgewerkte site: 21,2020 april) en FDA heeft het beleid uitgegeven voor diagnostische tests voor Coronavirus Disease-2019 tijdens de noodsituatie (uitgegeven op 16.2020 ), waarin serologische testen van de IgM/IgG -antilichamen alleen als screeningstest zijn geselecteerd.
Nucleïnezuurdetectiemethode
RT_PCR is een zeer gevoelige nucleïnezuurtest die is ontworpen om te detecteren of het nieuwe coronavirus RNA al dan niet aanwezig is in de luchtwegen of een ander monster. Een positief PCR-testresultaat betekent de aanwezigheid van nieuw coronavirus-RNA in het monster om de Covid-19-infectie te bevestigen. Een negatief PCR -testresultaat betekent niet dat de afwezigheid van de virusinfectie kan worden beïnvloed door een slechte monsterkwaliteit of ziektetijdpunt in de herstelde fase, enz. Hoewel RT-PCR een zeer gevoelige test is, heeft het verschillende nadelen. RT-PCR-tests kunnen arbeidsintensief en tijdrovend zijn, cruciaal afhankelijk van de hoge kwaliteit van het monster. Dit kan een uitdaging zijn omdat de hoeveelheid virale RNA niet alleen enorm varieert tussen verschillende patiënten, maar ook kan variëren binnen dezelfde patiënt, afhankelijk van de tijdstippen wanneer het monster wordt verzameld, evenals de infectiefasen of het begin van klinische symptomen. Het detecteren van het nieuwe coronavirus vereist van hoge kwaliteit exemplaren die een voldoende hoeveelheid intact virale RNA bevatten.
De RT-PCR-test kan een onjuist negatief resultaat (vals negatief) opleveren voor sommige patiënten met COVID-19-infectie. Zoals we weten, bevinden de belangrijkste infectiesites van de roman coronavirus zich aan de long en het lagere luchtwegen, zoals alveoli en bronchi. Daarom wordt het sputummonster van een diepe hoest of de bronchoalveolaire lavagevloeistof (BALF) beschouwd als de hoogste gevoeligheid voor virale detectie. In de klinische praktijk worden monsters echter vaak verzameld uit de bovenste luchtwegen door het gebruik van nasofaryngeale of oropharyngeale wattenstaafjes. Het verzamelen van deze monsters is niet alleen ongemakkelijk voor patiënten, maar vereist ook speciaal opgeleid personeel. Om bemonstering minder invasief of eenvoudiger te maken, kunnen de patiënten in sommige gevallen een oraal wattenstaafje krijgen en hen toestaan een monster uit het buccale slijmvlies of tong te nemen. Zonder voldoende virale RNA kan RT-qPCR een vals-negatief testresultaat retourneren. In de provincie Hubei, China, werd RT-PCR-gevoeligheid bij de initiële detectie slechts ongeveer 30%-50%gerapporteerd, met een gemiddelde van 40%. De hoge snelheid van vals-negatief werd hoogstwaarschijnlijk veroorzaakt door onvoldoende bemonstering.
Bovendien vereist de RT-PCR-test sterk getraind personeel om complexe RNA-extractiestappen en PCR-amplificatieprocedure uit te voeren. Het vereist ook een hoger niveau van bioveiligheidsbescherming, speciale laboratoriumfaciliteit en realtime PCR-instrument. In China moet de RT-PCR-test voor COVID-19-detectie worden uitgevoerd in laboratoria van bioveiligheid niveau 2 (BSL-2), met personeelsbescherming met behulp van bioveiligheidsniveau 3 (BSL-3). Volgens deze vereisten, van begin januari tot begin februari 2020, kon de capaciteit van het CDC -laboratorium van China Wuhan slechts enkele honderd gevallen per dag detecteren. Normaal gesproken zou dit geen probleem zijn bij het testen van andere infectieziekten. Bij het omgaan met een wereldwijde pandemie zoals COVID-19 met mogelijk miljoenen mensen die moeten worden getest, wordt RT-PCR een kritieke kwestie vanwege de vereisten voor speciale laboratoriumfaciliteiten of technische apparatuur. Deze nadelen kunnen de RT-PCR beperken die moet worden gebruikt als een efficiënt hulpmiddel voor screening, en kunnen ook leiden tot vertragingen in de meldingen van testresultaten.
Serologische antilichaamdetectiemethode
Met de voortgang van het ziekteverloop, vooral in de middelste en late stadia, is de antilichaamdetectiesnelheid zeer hoog. Een studie in het Wuhan Central South Hospital toonde aan dat het antilichaamdetectiegraad meer dan 90% zou kunnen bereiken in de derde week van COVID-19-infectie. Ook is het antilichaam het product van de menselijke immuunrespons tegen de nieuwe coronavirus. De antilichaamtest biedt verschillende voordelen ten opzichte van RT-PCR. Ten eerste test het serologisch antilichaam eenvoudig en snel. Antilichaam laterale stroomtests kunnen worden gebruikt voor point-of-care om een resultaat in 15 minuten te leveren. Ten tweede is het doel dat wordt gedetecteerd door de serologische test het antilichaam, waarvan bekend is dat het veel stabieler is dan viral RNA. Tijdens het verzamelen, transport, opslag en testen zijn de monsters voor antilichaamtests over het algemeen stabieler dan de monsters voor RT-PCR. Ten derde, omdat het antilichaam gelijkmatig is verdeeld in de bloedcirculatie, is er minder bemonsteringsvariatie in vergelijking met de nucleïnezuurtest. Het monstervolume dat nodig is voor de antilichaamtest is relatief klein. Bijvoorbeeld, 10 microliter vingerprick-bloed is voldoende voor gebruik in de antilichaam laterale stroomtest.
Over het algemeen wordt de antilichaamtest gekozen als een supplementgereedschap voor nucleïnezuurdetectie om de detectiesnelheid van de nieuwe coronavirus tijdens de ziektecursussen te verbeteren. Wanneer de antilichaamtest wordt gebruikt samen met een nucleïnezuurtest, kan dit de nauwkeurigheid van de test verhogen voor de diagnose van COVID19 door potentiële vals-positieve en vals-negatieve resultaten te verminderen. De huidige bedrijfshandleiding beveelt niet aan om twee soorten tests afzonderlijk te gebruiken als een onafhankelijk detectieformaat, maar moet als een gecombineerd formaat worden gebruikt. [2]
Figuur 2:De juiste interpretatie van nucleïnezuur- en antilichaamtestresultaten voor de detectie van nieuwe coronavirusinfectie
Figuur 3:Liming Bio-Products Co., Ltd.-Novel Coronavirus IgM/IgG Antilichaam Dual Rapid Test Kit (Strongstep®SARS-COV-2 IgM/IgG-antilichaam Rapid Test, latex immunochromatografie)
Figuur 4:Liming Bio-Products Co., Ltd.-Strongstep®Nieuwe coronavirus (SARS-COV-2) multiplex real-time PCR-kit (detectie voor drie genen, fluorescerende sondemethode).
Opmerking:Deze zeer gevoelige, kant-en-klare PCR-kit is beschikbaar in gelyofiliseerd formaat (vriesdroogproces) voor langdurige opslag. De kit kan worden getransporteerd en opgeslagen op kamertemperatuur en is een jaar stabiel. Each tube of premix contains all of the reagents needed for the PCR amplification, including Reverse-transcriptase, Taq polymerase, primers, probes, and dNTPs substrates.Users can simply reconstitute the mix by adding PCR-grade water along with the template and then load op een PCR -instrument om de versterking uit te voeren.
In reactie op de nieuwe coronavirus-uitbraak heeft Liming Bio-Products Co., Ltd. snel gewerkt om twee diagnostische kits te ontwikkelen om klinische en volksgezondheidslaboratoria in staat te stellen snel COVID-19-infectie te diagnosticeren. Deze kits zijn zeer geschikt voor gebruik voor grootschalige screening in landen en regio's waar de nieuwe coronavirusuitbraak zich snel verspreidt, en voor het bieden van diagnose en bevestiging voor COVID-19-infectie. Deze kits zijn alleen voor gebruik onder pre-genotifieerde Emergency Use Authorization (PEUA). Testen is beperkt tot laboratoria die zijn gecertificeerd onder de voorschriften van de nationale of lokale autoriteiten.
Antigeen detectiemethode
1. Virale antigeendetectie wordt geclassificeerd in dezelfde categorie van directe detectie als nucleïnezuurdetectie. Deze directe detectiemethoden zoeken naar bewijs van virale pathogenen in het monster en kunnen worden gebruikt voor bevestigingsdiagnose. De ontwikkeling van antigeendetectiekits vereist echter een hoge kwaliteit van monoklonale antilichamen met sterke affiniteit en hoge gevoeligheid die in staat is om pathogene virussen te herkennen en vast te leggen. Het duurt meestal meer dan zes maanden om een monoklonaal antilichaam te selecteren en te optimaliseren dat geschikt is voor gebruik bij de bereiding van de antigeendetectiekit.
2. Momenteel zijn de reagentia voor directe detectie van de nieuwe coronavirus nog steeds onder onderzoeks- en ontwikkelingsfase. Daarom is geen antigeendetectiekit klinisch gevalideerd en commercieel verkrijgbaar. Hoewel eerder werd gemeld dat een diagnostisch bedrijf in Shenzhen een antigeendetectiekit heeft ontwikkeld en klinisch in Spanje is getest, konden de betrouwbaarheid en nauwkeurigheid niet worden gevalideerd vanwege de aanwezigheid van problemen met reagenskwaliteit. Tot op heden heeft NMPA (voormalig China FDA) nog geen antigeendetectiekit goedgekeurd voor klinisch gebruik. Concluderend zijn verschillende detectiemethoden ontwikkeld. Elke methode heeft zijn voordelen en beperkingen. De resultaten van verschillende methoden kunnen worden gebruikt voor verificatie en complement.
3. Het produceren van een kwaliteit COVID-19-testkit hangt sterk af van optimalisatie tijdens onderzoek en ontwikkeling. Liming Bio-Product Co., Ltd. Testkits zijn vereist om te voldoen aan strikte normen voor productie- en kwaliteitscontrole om ervoor te zorgen dat ze de hoogste niveaus van prestaties en consistentie bieden. De wetenschappers van Liming Bio-Product Co., Ltd. hebben meer dan twintig jaar ervaring in het ontwerpen, testen en optimaliseren van in vitro diagnostische kits om het hoogste prestatieniveau bij analytische kwantificering te garanderen.
Tijdens de Covid-19-pandemie werd de Chinese overheid geconfronteerd met een toename van de enorme vraag naar epidemische preventiematerialen in de internationale hotspots. Op 5 april, op de persconferentie van het staatsraad Joint Prevention and Control-mechanisme "versterken van het kwaliteitsbeheer van medisch materiaal en reguleert de volgorde van de markt", Jiang Fan, een inspecteur op het eerste niveau van het ministerie van Buitenlandse Zaken van het ministerie van Commerce, zei: "Vervolgens zullen we onze inspanningen richten op twee aspecten, eerst, om de steun te versnellen van meer medische benodigdheden die de internationale gemeenschap nodig hebben, en ook om de kwaliteitscontrole, regulering en het beheer van de producten te verbeteren. We zullen de bijdrage van China leveren om gezamenlijk te reageren op de wereldwijde epidemie en een gemeenschap op te bouwen met een gedeelde toekomst voor de mensheid.
Figuur 5:Liming Bio-Products Co., Ltd.'s nieuwe Coronavirus-reagens heeft het EU CE-registratiecertificaat verkregen
Het erecertificaat
Houding
Figuur 6. Liming Bio-Products Co., Ltd. steunde Wuhan Vulcan (Houshenshan) bergziekenhuis om te vechten tegen de Covid-19-epidemie en kreeg het eredoctoraat van Wuhan Rode Kruis. Wuhan Vulcan Mountain Hospital is het beroemdste ziekenhuis in China dat gespecialiseerd is in de behandeling van ernstige covid - 19 patiënten.
Terwijl de nieuwe coronavirusuitbraak zich over de hele wereld verspreidt, gaat Nanjing Liming Bio-Products Co., Ltd. op om gemeenschappen wereldwijd te ondersteunen en te helpen met onze innovatieve technologieën om deze ongekende wereldwijde dreiging te bestrijden. Snelle testen van COVID-19-infectie is een cruciaal onderdeel van het aanpakken van deze dreiging. We blijven op een belangrijke manier bijdragen door hoogwaardige diagnostische platforms te bieden in de handen van frontline gezondheidswerkers, zodat mensen de kritische testresultaten kunnen ontvangen die ze nodig hebben. Liming Bio-Products Co., de inspanningen van Ltd. in de strijd tegen Covid-19-pandemie zijn om onze technologieën, ervaringen en expertise bij te dragen aan internationale gemeenschappen voor de bouw van een wereldwijde gemeenschap van Destiny.
Long Press ~ Scan en volg ons
E -mail: sales@limingbio.com
Website: https://limingbio.com
Posttijd: mei-01-2020
